In Underworld: Evolution gaat de saga over de oorlog tussen de aristocratische Death Dealers (vampiers) en de barbaarse Lycans (weerwolven) verder. De film schetst het begin van de oude vete tussen de twee stammen. Het hedendaagse verhaal van dodelijke actie, meedogenloze intrige en verboden liefde voert hen mee naar de strijd die een einde moet maken aan alle oorlogen en waarin de onsterfelijken eindelijk hun straf onder ogen moeten zien.

Kevin, die lijdt aan een meervoudige persoonlijkheidsstoornis, heeft 23 persoonlijkheden aan zijn psychiater Dr. Fletcher onthuld. Maar dat zijn ze niet allemaal, er is nog één die alle anderen wil overnemen en Kevin aanzet tot het ontvoeren van drie tienermeisjes waaronder de scherpzinnige Casey. Samen met zijn vertrouwde psychiater Dr. Fletcher moet Kevin een overlevingsstrijd voeren met alle persoonlijkheden die in hem schuilen.