In Underworld: Evolution gaat de saga over de oorlog tussen de aristocratische Death Dealers (vampiers) en de barbaarse Lycans (weerwolven) verder. De film schetst het begin van de oude vete tussen de twee stammen. Het hedendaagse verhaal van dodelijke actie, meedogenloze intrige en verboden liefde voert hen mee naar de strijd die een einde moet maken aan alle oorlogen en waarin de onsterfelijken eindelijk hun straf onder ogen moeten zien.