De gescheiden Larry Daley, heeft ondanks zijn vasthoudende pech in het leven, het gevoel dat er iets groots staat te gebeuren. Hoe groot, weet hij zelf ook niet, totdat hij met enige tegenzin een baan als nachtbewaker in het Historisch Museum accepteert. Al tijdens zijn eerste dienst wordt het hem duidelijk dat hij wel eens een cruciale rol in de wereldgeschiedenis kan gaan spelen. 's Nachts gebeuren er in het museum wel heel eigenaardige dingen...